FQ transfert de gènes dans les cellules eucaryotes

Objectifs

La formation, au travers de cours théoriques et d'applications pratiques portant sur des exemples concrets, abordera les différents types de transferts de gènes dans les cellules eucaryotes utilisés dans les laboratoires. Elle permet à la fois d'avoir une vision globale de ces différentes techniques ainsi que leur mise en application en fonction des différents types cellulaires utilisés. Cette formation permet ainsi de comparer les différentes techniques entre elles mais également entre différentes lignées par exemple non adhérente (jurkat) ou adhérentes (C2C12, HeLa). Enfin, cette formation permet également d'aborder les notions de différents systèmes (rapporteurs GFP, luciférase) pour suivre le transfert de gènes dans ces cellules mais aussi le maintien de ces gènes après transfert

Programme de la formation

Partie théorique (1h/jour)
Promoteurs eucaryotes, structure, fonctionnement
Généralités
Les techniques de transfert de gènes, adaptation aux différents types cellulaires
Les différentes méthodes de transfection
Vectorologies virales et non virales
Stabilisation de gènes
Les différents marqueurs de sélection
Stratégies de maintien des clones stables
Gènes rapporteurs et méthodes de mesure
Partie pratique (6h/jour)
Optimisation et comparaison de différentes techniques de transfert de gènes :
Électroporation et transfection à la lipofectamine ou au jet prime.
Utilisation de trois lignées cellulaires : une non adhérente (Jurkat) et
deux adhérentes (C2C12 et HeLa) et une lignée primaire (myoblastes
de souris)
Utilisation de différents gènes rapporteurs (GFP et Luciférase)
Analyse d'une sélection de clone de lignée inductible (Tet-on)
Etudes d'une voie de transduction du signal NFkB

Validation et sanction

Attestation d'acquis ou de compétences;Attestation de suivi de présence

Type de formation

Non certifiante

Sortie

Bac + 3 et 4